熒光抗體在使用前應加以鑒定，鑒定指標記包括效價及熒光素與蛋白質的結合比率，抗體效價可以用瓊脂雙擴散法進行滴定，效價大于1:16者較為理想，熒光素與蛋白質結合比率（F/P）的測定和計算的基本方法是：將制備的熒光抗體稀釋至A2801≈1.0，分別測讀A280（蛋白質特異吸收峰）和標記熒光素的特異吸收峰，按公式計算。

　　F/P值越高，說明抗體分子上結合的熒光素越多，反之則越少，一般用于固定標本的熒光抗體以F/P＝1.5為宜，用于活細胞染色的以F/P＝2.4為宜。

　　熒光抗體工作濃度的確定方法類似ELISA間接法中酶標抗體的滴定，將熒光抗體自1:4～1:256倍比稀釋，對切片標本作熒光抗體染色。以能清晰顯示特異熒光、且非特異染色弱的最高稀釋度為熒光抗體工作濃度。

　　熒光抗體的保存應注意防止抗體失活和防止熒光猝滅，最好小量分裝，－20℃凍存，這樣就可放置3～4年。在4℃中一般也可存放1～2年。

　　熒光抗體規(guī)律：

　?。?）初次反應產(chǎn)生抗體：當抗原次進入機體時，需經(jīng)一定的潛伏期才能產(chǎn)生抗體，且抗體產(chǎn)生的量也不多，在體內維持的時間也較短。

　?。?）再次反應產(chǎn)生抗體：當相同抗原第二次進入機體后，開始時，由于原有抗體中的一部分與再次進入的抗原結合，可使原有抗體量略為降低。隨后，抗體效價迅速大量增加，可比初次反應產(chǎn)生的多幾倍到幾十倍，在體內留存的時間亦較長。

　　（3）回憶反應產(chǎn)生抗體：由抗原刺激機體產(chǎn)生的抗體，經(jīng)過一定時間后可逐漸消失。此時若再次接觸抗原，可使已消失的抗體快速上升。如再次刺激機體的抗原與初次相同，則稱為特異性回憶反應；若與初次反應不同，則稱為非特異性回憶反應。非特異性回憶反應引起的抗體的上升是暫時性的，短時間內即很快下降。